【木瓜蛋白酶】酶活测定

时间:2021-07-08点击次数:483

酶活测定

本方法仅适用于木瓜蛋白酶。

基本原理

木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(底物)水解而释出N-苯甲酰-L-精氨酸,其释出量可用氢氧化钠液滴定,以此确定酶活力。

酶活单位

在25℃下,每分钟内能催化分解1umol底物的酶量,称为1单位。

试液制备

1、底物溶液:准确称取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐1.42g,加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL,加适量水,用0.1mol/L氢氧化钠液调节pH至6.2,较后定容至50.0mL。
2、待测酶液:取试样用水稀释至适当浓度,并调节至pH6.2。

测定方法

25℃恒温条件下,取25mL烧杯装在pH自动滴定仪上,加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化钠溶液2.50mL、重蒸馏水1.25mL,混合后加入待测酶液后立即计时,用0.1mol/L氢氧化钠在电磁搅拌下连续滴定以保持pH6.2,记下每分钟所耗0.01mol/L氢氧化钠毫升数。同时进行空白校正。按下式计算木瓜蛋白酶的活力P(单位/mg):
P =C·ΔV·1000/W
式中:c:氢氧化钠液的浓度,mol/L;ΔV:每分钟消耗氢氧化钠液的体积减去空白值;W:反应液中木瓜蛋白酶的质量,mg。


http://gzhuaqi.cn.b2b168.com

产品推荐